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    氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒原理介紹

    發布時間: 2016/8/5  點擊次數: 898次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大小:
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    使用目的:
    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量。
    氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。用純化的人
    氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入
    氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),再與HRP 標記的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗體結合,形成
    抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下
    轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的氧化低密度脂蛋白
    (ox-LDL)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣
    品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)濃度。
    試劑盒組成
    1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
    2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品(320µg/L)0.5ml×1 瓶
    3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
    4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
    5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
    6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
    標本要求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒操作步驟
    1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
    釋。
    160µg/L 5 號標準品150µl 的原倍標準品加入150µl 標準品稀釋液
    80µg/L 4 號標準品150µl 的5 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
    40µg/L 3 號標準品150µl 的4 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
    20µg/L 2 號標準品150µl 的3 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
    10µg/L 1 號標準品150µl 的2 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
    待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,
    然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
    量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
    4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
    重復5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同3。
    8. 洗滌:操作同5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    15 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉)。
    11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
    液后15 分鐘以內進行。
    操作程序總結:
    計算
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
    OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標
    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
    即為樣品的實際濃度。
    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
    用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
    控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值
    大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計
    算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
    氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 個月

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