激光顯微細胞分離技術(shù)

激光顯微細胞分離技術(shù)
美國國立健康研究院腫瘤研究所病理研究室與生物醫(yī)學設備組合作研發(fā)激光俘獲顯微切割技術(shù)，發(fā)展為Acturus 的PixCell II系統(tǒng)。在操作這套系統(tǒng)時，首先在組織切片上覆蓋一層透明的膜，在顯微鏡下觀察該組織切片，選擇某一特殊細胞后，開啟脈沖式紅外激光束，使膜融化變得粘性很強（該膜的成份為 Ethylene Vinyl Acetate Polymer），等到冷卻后將該位置的細胞牢固地粘附在上面從而分離細胞。
該種方法較以往方法改進之處：首先，它簡單，不需要移動任何切片部位，一步即可完成從組織中分離特殊細胞，這些在膜上的細胞依然保持其原有的形態(tài)，使用無菌、一次性的膜可zui大限度地避免可能的污染。這對于后續(xù)進行PCR檢測是尤為重要的。其次，使膜活化所需的激光能量很小（<50mW），與常規(guī)顯微配合是充足的，完夠滿足臨床病理組織細胞顯微分離的需要。再者，LCM技術(shù)分離細胞速度較以往方法有很大提高，例如，從腎組織切片中分離一個腎小球（Glomerulus）所需時間小于10秒，一小時內(nèi)即可輕松地分離上百個腎小球。
神經(jīng)系統(tǒng)主要由兩類細胞組成：神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞。在腦內(nèi)，不同解剖區(qū)域行使不同功能，這里所講的解剖區(qū)域是指核團。核團在顯微鏡下才可以辨別，是相對集中在一個區(qū)域的可能行使一定功能的神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞的集合體。把某個核團從腦內(nèi)取出來是不太現(xiàn)實的。腦內(nèi)核團數(shù)以百計，如果要想研究基因在腦內(nèi)核團的表達水平，在以前只能用原位雜交技術(shù)。
如果要想研究蛋白質(zhì)的表達水平或磷酸化等狀態(tài)，只能用免疫組織化學技術(shù)。而這兩個技術(shù)雖然能定位基因或蛋白質(zhì)在腦內(nèi)核團的表達情況,缺點是通量小。
因此，如果研究者主要是為了研究很多種基因在特定核團的神經(jīng)元或膠質(zhì)細胞的表達情況，新的解決方案之一就是組合LCM技術(shù)、RNA擴增技術(shù)和基因芯片技術(shù)。即利用LCM技術(shù)將特定核團的神經(jīng)元或膠質(zhì)細胞取出，提取總RNA或mRNA，RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA并進行擴增.zui后將cDNA標記為探針，和基因芯片雜交。如果研究的基因種類數(shù)不多，那么也可以只提取LCM獲得的細胞的總RNA，利用定量RT-PCR技術(shù)來進行基因表達分析。

激光顯微細胞分離技術(shù)