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    多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定

    發(fā)布時(shí)間: 2011-12-08  點(diǎn)擊次數(shù): 2071次

    多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定
    (一)抗體的鑒定
    1、抗體的效價(jià)鑒定 不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較價(jià)。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。
    2、抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。抗體的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時(shí)的濃度,并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
    交叉反應(yīng)率=IC50時(shí)抗原濃度(Y)/ IC50近似抗原物質(zhì)的濃度(Z)X 100%
    如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí),表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
    3、抗體的親和力 抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在108~1010/mol,也有多達(dá)1014/mol。抗體親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選,確定抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
    (二)抗血清的凍存
    抗血清收獲后,加1/萬(wàn)硫柳汞或1/萬(wàn)的疊氮鈉防腐,或加入等量的中性甘油,分裝小瓶,置-20℃以下的低溫保存,數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價(jià)無(wú)明顯變化。注意避免反復(fù)凍融。也可將抗血清冷凍干燥后保存。
    多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定
     

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