本周焦點(diǎn) ELISA試驗(yàn)操作失敗的主要原因

我們知道，ELISA測(cè)定中影響要素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在查驗(yàn)中除正常反響外，有時(shí)常可見到一些過錯(cuò)結(jié)果(即假陽性或假陰性)，那么致使試驗(yàn)不成功的主要原因有哪些咧？

：標(biāo)本的影響：

溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易發(fā)生假陽性。或許是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗刷過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，發(fā)生假陽性。所以嚴(yán)峻溶血標(biāo)本禁用。
   
第二，標(biāo)本受細(xì)菌污染：

因菌體中或許含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因而，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本相同，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測(cè)定結(jié)果。
   
第三，標(biāo)本保存不妥：

在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、形成假陽性；為克服上述攪擾，ELISA試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集；如不能立即測(cè)定，5d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)部分濃縮，分布不均，應(yīng)充沛混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振動(dòng)。
   
第四，標(biāo)本凝結(jié)不全：

在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝結(jié)時(shí)即強(qiáng)行離心別離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中能夠形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易形成假陽性結(jié)果；因而血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清。